核酸提取儀,是應用配套的核酸提取試劑來(lái)自動(dòng)完成樣本核酸的提取工作的儀器,核酸提取儀分為兩類(lèi):一類(lèi)是大型的自動(dòng)化的,一般稱(chēng)為自動(dòng)液體工作站;另一類(lèi)是小型自動(dòng)核酸提取儀,利用封裝好的配套試劑自動(dòng)完成提取純化過(guò)程。
配合提取單個(gè)標本的獨立分裝試劑,操作過(guò)程中,只需要加入標本動(dòng)作,儀器自動(dòng)完成提取純化的全過(guò)程,不需要加入提取過(guò)程中所需要的試劑過(guò)程,是真正得到應用的小型自動(dòng)核酸提取儀。
1. 根據儀器型號大小不同劃分
1) 自動(dòng)液體工作站
自動(dòng)液體工作站是功能非常強大的設備,液體分液、吸液等自動(dòng)完成,甚至能通過(guò)整合擴增、檢測等功能,實(shí)現標本提取、擴增、檢測全自動(dòng)化。提取核酸只是其功能的一個(gè)應用,不太適合常規實(shí)驗室提取核酸,一般都應用在單一類(lèi)標本并且一次提取標本量非常大(至少96個(gè),一般幾百個(gè))的實(shí)驗需求上。自動(dòng)工作站的平臺建立及平臺的運作,需要比較大的資金。
2) 小型自動(dòng)核酸提取儀
小型的自動(dòng)化儀器是通過(guò)運行結構的特殊性來(lái)達到自動(dòng)提取核酸的目的,可以在任何實(shí)驗室得到應用。
2. 根據提取原理不同劃分
1) 采用離心柱法的儀器
離心柱法核酸提取儀主要采用離心機和自動(dòng)移液裝置相結合的方法,通量一般在1-12個(gè)樣本,操作時(shí)間和手工提取差不多,并不能提高實(shí)際工作效率,且價(jià)格昂貴,不同型號儀器的耗材也不能通用,僅適合經(jīng)費充足的大型實(shí)驗室使用。
2) 采用磁珠法的儀器
以磁珠為載體,利用磁珠在高鹽低PH值下吸附核酸,在低鹽高PH值下與核酸分離的原理,再通過(guò)移動(dòng)磁珠或轉移液體來(lái)實(shí)現核酸的整個(gè)提取純化過(guò)程。由于其原理的*性,所以可設計成很多種通量,既可以單管提取,也可以提取8-96個(gè)樣本,且其操作簡(jiǎn)單快捷,提取96個(gè)樣本僅需30-45min,大大提高了實(shí)驗效率,且成本低廉,因而可以在不同實(shí)驗室使用,是目前市場(chǎng)上的主流儀器。
磁珠法自動(dòng)核酸提取儀又分為磁棒法和抽吸法
先說(shuō)抽吸法:顧名思義,抽吸法就是通過(guò)自動(dòng)移液裝置來(lái)進(jìn)行,通過(guò)自動(dòng)移液裝置來(lái)加入裂解液、磁珠吸附;抽走裂解液,加入漂洗液,磁珠吸附,抽走漂洗液,加入洗脫緩沖液。從步驟上好像沒(méi)什么問(wèn)題,但是抽吸法大的問(wèn)題在于,為了在去除廢液的時(shí)候不抽走磁珠,移液器不能靠磁珠太近,以防磁珠連同廢液被抽掉,這樣每一次抽廢液的時(shí)候總有一小部分不能*的抽走,特別是磁鐵在底部的裝置,因為磁珠被磁鐵吸附在底部,所以移液器不能靠底部太近,這樣漂洗液就不能*去除,殘留的漂洗液中的鹽和乙醇會(huì )影響后面的洗脫效率和PCR成功率;磁鐵在側面的裝置殘留的液體會(huì )少些,但是洗脫的效率也不好,依靠DNA自行溶解到洗脫緩沖液中,除非等上半小時(shí)以上,所以有些96自動(dòng)核酸提取工作站,提取一輪的時(shí)間需要150分鐘,32磁棒法的同樣的時(shí)間可以提5輪了。
再說(shuō)磁棒法核酸提取儀:通量通常有8、16、32、96通道,相對于抽吸法,磁棒法的優(yōu)點(diǎn)是每一步的液體不殘留,因為磁棒只帶走磁珠,轉移到下一個(gè)步驟相應的反應孔中,另外選擇磁棒法的提取儀器好要功能更齊全的,比如可以加熱,每個(gè)加熱槽好獨立溫控,這樣可以設置加熱、裂解、洗脫的不同溫度,另外很重要的一點(diǎn)是,帶動(dòng)磁棒的電機要能帶動(dòng)磁棒進(jìn)行液體的快速混勻和攪拌,這樣才有利于自動(dòng)化和有助于裂解和漂洗*。磁棒法的通量選擇好是32通道,96通道的看似通量更高,但是有個(gè)很現實(shí)的問(wèn)題,96個(gè)磁力棒在從一個(gè)板轉移至另外一個(gè)板的時(shí)候,磁力棒上面的液體中途滴下來(lái)怎么辦,它會(huì )滴到別的孔中造成污染,而32通道的磁力棒運行軌跡不經(jīng)過(guò)其他樣本的上空,這樣不會(huì )交叉污染。